编者的话：自2024年1月1日起，本微信公众年夜众号“十全斗”被授权在“今日头条“、”知乎”等网络信息平台上刊登中国生物医学电子显微镜独立科研机构——微亚实验室的科普文章，敬请关注。干系超微构造学术研讨和生物医学电镜技能互换等事宜，请直接与微亚实验室联系。
微亚电镜网 | 微亚讲座 取材与固定篇 （1）
Q
取材前要做哪些准备？
A
（1）检索文献——充分检索文献，以明确：是否须要做超微构造？是否有光镜的研究根本？
适宜采取何种EM技能？实验设计及预期结果？
（2）设计取材方案——明确器官、部位、方向、大小、多少，以及解剖定位的办法等；
（3）实验材料——根据取材设计方案做好准备：动物、器材、器皿、分外材料、试剂等；
（4）沟通与合营——实验室与课题组双方对研究内容和有关的技能问题充分沟通。
Q
组织取材应把稳哪些问题？
A
（1）定位准确——取材最主要的是定位准确，偏差应小于1mm；
（2）取材快捷——取材操作要快捷。样品在离体后以最快的速率浸入初固定液；
（3）样品尺寸得当——对样品尺寸的限定紧张是基于固定液穿透能力的考虑。用于生物TEM样品的大多数固定液的穿透能力较弱，尤其1～2%四氧化锇固定液的有效固定深度约为0.5mm。虽然采取多聚甲醛和戊二醛稠浊固定液做初固定液，可有效增加固定速率和深度，但1～2%四氧化锇固定液仍无法达到大于0.5mm的深度。样品粒径过大，内部固定不良，会形成自外而内的固定梯度，由固定不良带来的人工假象滋扰超微构造的剖析。然而，太小的样品不仅限定不雅观察内容，而且随意马虎在制备过程中丢失。实际取材的样品块大小和形状常日设计为三种（图1-ABC）：第一种（图1-A）靠近正方体形状的样品颗粒，尺寸约为1×1×1mm；第二种（图1-B）靠近长方体形状的样品条，尺寸约为1×1×3mm（2-3均可，代制备前修整）；第三种（图1-C）为薄片状样品，尺寸约为1×2×3mm，或更宽、更长。不论是上述中哪一种形状的样品，总要让它有一对边的尺寸约为1mm，才能担保样品的固定质量；
（4）操作柔柔——避免金属用具对组织细胞的加持、挤压和牵拉。
图1 生物TEM样品组织取材大小尺寸、形状示意图。图1-B长条状样品条最常用，不仅便于标识组织的构造方向（肌纤维、神经纤维、极性组织细胞…），而且便于得到较大切片面积。
（待续）
微亚实验室创始人李伯勤教授参与编辑写作的生物医学电镜新著《生命科学中的电子显微镜技能》
微亚实验室简介
微亚生物科技有限公司是海内生物医学电镜领域的专业测试机构，是从事超微构造研究的独立实验室，是电镜技能互动互换的平台。在这里，我们可以帮忙您完成：干系科研课题设计、样品制备、各种染色、电镜不雅观察，以及超微构造图像的解读和剖析。
（编者注：本文经微亚实验室授权发布；部分插图源自微亚实验室生物医学超微构造样本图库；微信"大众年夜众号“十全斗”原创 20240424）
